|
Thực hiện một xét nghiệm '''ELISA''' liên quan đến ít nhất một [[kháng thể]] có tính đặc hiệu với một [[kháng nguyên]] cụ thể. Mẫu thử với một hàm lượng không xác định kháng nguyên trên một chất mang rắn (thường là một giếng vi thể bằng [[Polystyrene sulfonate|polystyrene]]) được cố định hoặc theo cách không đặc hiệu (thông qua hấp thu bề mặt) hoặc theo cách đặc hiệu (thông qua sự bắt giữ bởi kháng thể đặc hiệu khác cho cùng [[kháng nguyên]], trong một "[[Bánh mì kẹp|sandwich]]" '''ELISA'''). Sau khi [[kháng nguyên]] được cố định, sự phát hiện [[kháng thể]] được thêm vào, hình thành một phức hợp với [[kháng nguyên]]. [[Kháng thể]] phát hiện này có thể được kết nối [[hóa trị]] với một [[Enzym|enzyme]] hoặc có thể được phát hiện bằng [[kháng thể]] thứ hai - [[kháng thể]] này đã kết nối với [[Enzym|enzyme]] thông qua kết nối liên hợp sinh học. Giữa mỗi bước, thông thường giếng vi thể được rửa với [[dung dịch]] [[Chất tẩy rửa|chất tẩy]] có [[nồng độ]] loãng để loại bỏ bất kỳ những [[protein]] hoặc [[kháng thể]] nào khi chúng không có liên kết đặc hiệu. Sau bước rửa cuối cùng, giếng vi thể này được phát triển bằng cách thêm vào chất nền của [[Enzym|enzyme]] để tạo thành tín hiệu có thể quan sát được, điều này chỉ ra hàm lượng [[kháng nguyên]] có trong mẫu.
==Nguyên tắc==
Là một xét nghiệm hóa sinh phân tích và một kỹ thuật "phòng thí nghiệm ướt", ELISA liên quan đến việc phát hiện chất phân tích (tức là chất cụ thể mà sự hiện diện của nó đang được phân tích định lượng hoặc định tính) trong mẫu lỏng bằng phương pháp tiếp tục sử dụng thuốc thử lỏng trong quá trình phân tích. (tức là, chuỗi các phản ứng sinh hóa được kiểm soát sẽ tạo ra một tín hiệu có thể dễ dàng định lượng và được hiểu là một phép đo lượng chất phân tích trong mẫu) ở trạng thái lỏng và vẫn ở bên trong buồng phản ứng hoặc giếng cần thiết để chứa các chất phản ứng. Điều này trái ngược với các kỹ thuật "phòng thí nghiệm khô" sử dụng các dải khô. Ngay cả khi mẫu là chất lỏng (ví dụ, một giọt nhỏ đo được), bước phát hiện cuối cùng trong phân tích "khô" bao gồm việc đọc dải đã khô bằng các phương pháp như đo phản xạ và không cần buồng chứa phản ứng để ngăn tràn hoặc trộn lẫn giữa các mẫu. .
Là một thử nghiệm không đồng nhất, ELISA tách một số thành phần của hỗn hợp phản ứng phân tích bằng cách hấp phụ các thành phần nhất định vào một pha rắn được cố định vật lý. Trong ELISA, một mẫu lỏng được thêm vào pha rắn tĩnh với các đặc tính liên kết đặc biệt và được theo sau bởi nhiều thuốc thử lỏng được thêm vào, ủ và rửa một cách tuần tự, sau đó là một số thay đổi quang học (ví dụ, sự phát triển màu sắc bởi sản phẩm của enzym phản ứng) trong chất lỏng cuối cùng trong giếng mà từ đó lượng chất phân tích được đo. Việc "đọc" định lượng thường dựa trên việc phát hiện cường độ ánh sáng truyền qua bằng phép đo quang phổ, liên quan đến việc định lượng sự truyền của một số bước sóng ánh sáng cụ thể qua chất lỏng (cũng như đáy giếng trong suốt ở dạng đĩa nhiều giếng) . Độ nhạy của phát hiện phụ thuộc vào độ khuếch đại của tín hiệu trong các phản ứng phân tích. Vì phản ứng enzym là quá trình khuếch đại rất nổi tiếng, tín hiệu được tạo ra bởi các enzym được liên kết với thuốc thử phát hiện theo tỷ lệ cố định để cho phép định lượng chính xác, và do đó có tên "liên kết enzym".
Chất phân tích còn được gọi là phối tử vì nó sẽ liên kết hoặc liên kết đặc biệt với thuốc thử phát hiện, do đó ELISA thuộc loại lớn hơn của các xét nghiệm liên kết phối tử. Thuốc thử liên kết đặc hiệu với phối tử là "cố định", tức là, thường được tráng và làm khô lên đáy trong suốt và đôi khi cũng là thành bên của giếng ("pha rắn" / "chất nền rắn" tĩnh ở đây trái ngược với vi hạt / hạt rắn mà có thể bị rửa trôi), thường được cấu tạo như một tấm nhiều giếng được gọi là "tấm ELISA." Thông thường, giống như các hình thức xét nghiệm miễn dịch khác, tính đặc hiệu của phản ứng loại kháng nguyên-kháng thể được sử dụng vì có thể dễ dàng tăng kháng thể đặc hiệu chống lại một lượng lớn kháng nguyên làm thuốc thử. Ngoài ra, nếu bản thân chất phân tích là một kháng thể, thì kháng nguyên đích của nó có thể được sử dụng làm thuốc thử liên kết.
==Lịch sử==
Trước sự phát triển của ELISA, lựa chọn duy nhất để tiến hành xét nghiệm miễn dịch là xét nghiệm tìm kiếm phóng xạ, một kỹ thuật sử dụng kháng nguyên hoặc kháng thể được đánh dấu phóng xạ. Trong xét nghiệm phóng xạ, hoạt độ phóng xạ cung cấp tín hiệu cho biết liệu kháng nguyên hoặc kháng thể cụ thể có trong mẫu hay không. Radioimmunoassay lần đầu tiên được mô tả trong một bài báo khoa học của Rosalyn Sussman Yalow và Solomon Berson xuất bản năm 1960.
Vì phóng xạ gây ra một mối đe dọa sức khỏe tiềm ẩn, một giải pháp thay thế an toàn hơn đã được tìm kiếm. Một phương pháp thay thế thích hợp cho phương pháp xét nghiệm phóng xạ sẽ thay thế tín hiệu không phóng xạ thay cho tín hiệu phóng xạ. Khi các enzym (như peroxidase củ cải ngựa) phản ứng với các chất nền thích hợp (như ABTS hoặc TMB), sự thay đổi màu sắc xảy ra, được sử dụng như một tín hiệu. Tuy nhiên, tín hiệu phải được liên kết với sự hiện diện của kháng thể hoặc kháng nguyên, đó là lý do tại sao enzym phải được liên kết với một kháng thể thích hợp. Quá trình liên kết này được phát triển độc lập bởi Stratis Avrameas và G. B. Pierce. Vì cần phải loại bỏ mọi kháng thể hoặc kháng nguyên chưa liên kết bằng cách rửa, nên kháng thể hoặc kháng nguyên đó phải được cố định trên bề mặt của vật chứa; tức là chất hấp thụ miễn dịch phải được chuẩn bị. Một kỹ thuật để thực hiện điều này đã được Wide và Jerker Porath xuất bản vào năm 1966.
Năm 1971, Peter Perlmann và Eva Engvall tại Đại học Stockholm ở Thụy Điển, và Anton Schuurs và Bauke van Weemen ở Hà Lan đã độc lập xuất bản các bài báo tổng hợp kiến thức này thành các phương pháp thực hiện EIA / ELISA.
ELISA truyền thống thường liên quan đến các chất phóng xạ và chất nền tạo ra một số loại thay đổi màu sắc có thể quan sát được để chỉ ra sự hiện diện của kháng nguyên hoặc chất phân tích. Các kỹ thuật tương tự như ELISA mới hơn sử dụng các phóng viên PCR phát quang, điện hóa và phản ứng lượng tử để tạo ra các tín hiệu có thể định lượng được. Những phóng viên mới này có thể có nhiều lợi thế khác nhau, bao gồm độ nhạy cao hơn và khả năng ghép kênh. Về mặt kỹ thuật, các xét nghiệm mới hơn thuộc loại này không hoàn toàn là ELISA, vì chúng không "liên kết với enzym", mà thay vào đó là liên kết với một số phóng viên không có enzym. Tuy nhiên, do các nguyên tắc chung trong các xét nghiệm này phần lớn tương tự nhau, chúng thường được xếp vào cùng một loại với ELISA.
Vào năm 2012, một thử nghiệm ELISA siêu nhạy, dựa trên enzyme sử dụng các hạt nano như một chất phóng xạ sắc tố có thể đưa ra tín hiệu màu mắt thường, từ việc phát hiện ra các điểm yếu của chất phân tích. Màu xanh lam xuất hiện cho kết quả dương tính và màu đỏ cho kết quả âm tính. Lưu ý rằng chỉ phát hiện này có thể xác nhận sự có mặt hoặc không có chất phân tích, chứ không phải nồng độ thực tế.
== Xem thêm ==
* [[Miễn dịch]]
* [[Kháng nguyên]]
* [[Phản ứng kháng nguyên - kháng thể]]
* [[Thụ thể kháng nguyên của tế bào T]] (TCR)
* [[Tế bào lympho]]
* [[Bổ thể]]
==Tham khảo==
{{sơ khai}}
[[Thể loại: Miễn dịchY học]] ▼== Liên kết ngoài ==
* {{MeshName|ELISA}}
* [http://www.biology.arizona.edu/immunology/activities/elisa/main.html "Introduction to ELISA Activity"]—beginner walk-through of ELISA used for detecting HIV, including animations at the [[University of Arizona]]
{{Authority control}}
[[Thể loại:Sinh học tế bào]]
[[Thể loại:Sinh học phân tử]]
▲[[Thể loại:Miễn dịch học]]
[[Thể loại:Hệ miễn dịch]]
[[Thể loại:Glycoprotein]]
[[Thể loại:Kháng thể]]
| 